Abstrakt

Przedmiotem zgłoszenia jest sposób wytwarzania glochidonu o wzorze 1, który polega na tym, że prowadzi się regioselektywną enzymatyczną dehydrogenację lupeonu o wzorze 2 biokatalizatorem AcmB2 pozyskanym z genetycznie zmodyfikowanych komórek E. coli lub z bakterii Sterolibacterium denitrificans Chol-1S o sekwencji identycznej do Sekwencji 1 lub podobnej do Sekwencji 1 (identyczność nie mniejsza niż 70%) w środowisku wodno-organicznym, w obecności reutieniacza, którym jest 2,6-dichloroindofenol, metosiarczan fenazyny, heksacyjanożelazian III potasu, witamina K3 lub mieszanina 2,6-dichloroindofenolu i metosiarczanu fenazyny, w temperaturze 20-45°C, w mieszanie reakcyjnej, która zawiera: bufor zapewniający pH w zakresie 6,5-9,0 wybrany spośród potasowego buforu ortofosforanowego, buforu glicyna - wodorotlenek sodu lub buforu chlorowodorku tris(hydroksymetylo)aminometanowego, wodny roztwór solubilizatora o stężeniu 0—20% (w/v), którym jest 2-hydroksypropyl-β-cylkodekstryna, rozpuszczalnik organiczny 2-metoksyetanol lub 1,4- dioksan w ilości 1—10% (v/v), utrzymując biokatalityczną aktywność preparatu enzymatycznego o aktywności AcmB2 przez okres do 72 godzin, monitorując przebieg reakcji. Uzyskany w ten sposób produkt oczyszcza się metodą ekstrakcji do fazy stałej lub/i chromatograficznie.