Abstrakt

Przedmiotem zgłoszenia jest sposób enzymatycznej redukcji NAD+ o wzorze 1 do 1,4-NADH o wzorze 2, z użyciem wodoru jako reduktora, w których to wzorach Rib oznacza rybozę, a ADP oznacza adenozyno-5'-difosforan. Sposób polega na tym, że prowadzi się regioselektywną redukcję NAD+ w atmosferze stanowiącej mieszaninę wodoru i gazu obojętnego, w której stężenie wodoru wynosi 0,1-100% (v/v) lub gazu syntezowego zawierającego wodór, preparatem enzymatycznym o aktywności wolframowej oksydoreduktazy aldehydów (AOR) o sekwencji aminokwasowej wykazującej identyczność na poziomie przynajmniej 70% do sekwencji zdeponowanej w bazie Universal Protein Resource (UniProt) pod następującymi numerami referencyjnymi dla podjednostki AorA ebA5004, AorB ebA5005 i AorC ebA500, pochodzącej z bakterii Aromatoleum aromaticum EbN1, lub z genetycznie zmodyfikowanej bakterii A. aromaticum szczep SR7Δpdh, lub z systemu rekombinowanej nadekspresji w bakterii Aromatoleum evansii zawierającej plazmid z genami kodującymi co najmniej enzym AOR (tj. geny aorA, aorB, aorC) i ewentualnie gen kodujący białka szaperonowe (aorD i aorE), przy czym proces regioselektywnej redukcji substratu o wzorze 1 do produktu o wzorze 2 prowadzi się w środowisku wodnym, w temperaturze od 5°C do 40°C, pod ciśnieniem od 1 do 2 atmosfer, w mieszaninie reakcyjnej, która zawiera: bufor zapewniający pH w zakresie 5 - 9, NAD+ w stężeniu w środowisku reakcji od 0,1mM do 5 mM; utrzymując aktywność biokatalityczną preparatu enzymatycznego o aktywności wolframowej oksydoreduktazy aldehydów przez okres do 48 h.