Abstrakt

Przedmiotem zgłoszenia jest sposób wytwarzania (25R)-spirosta-1,4-dien-3-onu o wzorze 2, który polega na tym, że prowadzi się regioselektywną enzymatyczną dehydrogenację diosgenonu o wzorze 1 biokatalizatorem w postaci genetycznie zmodyfikowanych komórek E. coli lub preparatem enzymatycznym o aktywności KSTD pochodzącym z bakterii Sterolibacterium denitrificans Chol-1S DSM: 13999 o sekwencji identycznej do Sekwencji 1 lub podobnej do Sekwencji 1 (identyczność nie mniejsza niż 70%) lub z Rodococcus erythropolis SQ1 o sekwencji identycznej do Sekwencji 2 lub podobnej do Sekwencji 2 (identyczność nie mniejsza niż 70%) środowisku wodno-organicznym, w obecności reutleniacza, którym jest 2,6-dichloroindofenol, metosiarczan fenazyny lub mieszanina 2,6-dichloroindofenolu i metosiarczanu fenazyny, w temperaturze 20 - 45°C, w mieszanie reakcyjnej, która zawiera: - bufor zapewniający pH w zakresie 6,5 — 9,0 wybrany spośród potasowego buforu ortofosforanowego, buforu glicyna - wodorotlenek sodu lub buforu chlorowodorku tris(hydroksymetylo)aminometanowego, - wodny roztwór solubilizatora o stężeniu 0 — 10% (w/v), którym jest 2-hydroksypropyl-β-cylkodekstryna, rozpuszczalnik organiczny 2-metoksyetanol, dioksan lub izopropanol w ilości 1 — 4% (v/v), utrzymując biokatalityczną aktywność preparatu enzymatycznego o aktywności KSTD przez okres do 24 godzin, który to proces regioselektywnej dehydrogenacji diosgenonu ma następujący przebieg: do reaktora mieszalnikowego wprowadza się bufor, solubilizator rozpuszczony w wodzie, reutleniacz i diosgenon rozpuszczony w rozpuszczalniku organicznym, po czym inicjuje się reakcję dodając preparat enzymatyczny o aktywności KSTD i monitoruje się przebieg reakcji. Uzyskany w ten sposób produkt oczyszcza się metodą ekstrakcji do fazy stałej.